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          微生物學[第二章微生物的純培養和顯微鏡技術]山東大學期末考試知識點復習_圖文

          山東大學 期末考試知識點復習

          第二章
          一、要點提示

          微生物的純培養和顯微鏡技術

          1.由于微生物個體微小,在絕大多數情況下對微生物的研究、利用都是使 用其群體, 稱為培養物。 由于一般情況下只有純培養物才能提供可以重復的結果, 因此從混雜的天然微生物群中分離獲得某特定的微生物純培養, 是研究和利用微 生物的最重要的環節之一。 采用稀釋涂布或平板劃線技術在瓊脂平板上得到微生 物的單菌落是最常用的純種分離手段,而在分離、轉接及培養微生物純培養時防 止被其他微生物污染的無菌操作技術是進行微生物學研究的基礎, 并廣泛地被其 他學科和生產實際所利用。 2.通過分離純化得到的微生物純培養物,必須通過各種保藏技術使其在一 定時間內不死亡、不會因發生變異而丟失重要的生物學性狀、不會被其他微生物 污染或因自身泄漏而污染環境, 否則就無法真正保證微生物研究和應用工作的順 利進行。傳代培養、冷凍真空干燥保藏、低溫冰箱保藏及液氮保藏是通常使用的 微生物菌種保藏技術。 3.微生物個體微小,通常必須通過顯微鏡才能觀察到其個體形態,而進行 顯微觀察時,分辨率和反差是決定顯微觀察效果的兩個最重要的因素。它們與顯 微鏡的特性有關,也取決于樣品的制備與觀察技術。無論是光學顯微鏡還是電子 顯微鏡,其設備和技術發展迅速,應用面越來越廣泛和深入。 4.在顯微鏡下微生物的大小與形態千差萬別,豐富多彩,是區分不同微生 物和對其進行分類、鑒定的重要依據之一。 二、重點、難點剖析 1.無菌技術是最基本的微生物學實驗操作技術,其核心是無菌概念的建立, 以及正確而嚴格地按實驗教材和實驗課的要求, 掌握在各種情況下的具體應用原 則和操作規范。 2.分離獲得某特定的微生物純培養,是研究和利用微生物的基礎。獲得純

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          培養的方法有固體培養基分離、液體培養基分離和單細胞挑取 3 大類(表 2-1), 其中用固體培養基獲得單獨的微生物菌落是最常用、最基本的方法。此外還有活 細胞或活體分離法,如噬菌體和動植物病毒純培養的分離等。

          3.保證所用菌種性狀的穩定是微生物學工作最重要的基本要求,否則生產 或科研都無法正常進行。 而目前使用的各種微生物保藏技術歸納起來不外乎生活 態或休眠態兩種。下面所列的是目前較為常用的一些微生物菌種保藏方法。

          值得指出的是,由于微生物的多樣性,不同的微生物往往對不同的保藏方法 有不同的適應性,迄今為止尚沒有一種方法能被證明對所有的微生物均適宜。因

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          此,在具體選擇保藏方法時必須對被保藏菌株的特性、保藏物的使用特點及現有 條件等進行綜合考慮。對于一些比較重要的微生物菌株,則要盡可能多的采用各 種不同的手段進行保藏,以免因某種方法的失敗而導致菌種的喪失。 4.顯微鏡是微生物學研究的重要工具,對各類顯微鏡原理及應用特點的全 面、綜合了解是微生物學的重點內容之一(表 2-2)。

          5.樣品制備和顯微觀察也是微生物學的基本操作之一,應按實驗教材和實 驗課的要求, 掌握在各種情況下微生物樣品制備和顯微觀察的基本原理和操作規 范,了解各微生物類群在顯微鏡下的基本形態特征。 三、術語或名詞

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          1.菌落(colony)

          單個微生物細胞在適宜的固體培養基表面或內部生長、繁

          殖到一定程度形成的肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞生長群體。 2. 菌苔(lawn) 固體培養基表面眾多菌落連成一片時所形成的微生物生長群 體。 3.平皿(Petri dish) 由玻璃或透明塑料制成的圓形皿底和皿蓋組成,皿蓋可

          覆蓋于皿底之上, 防止空氣中微生物的污染。 其英文名稱是為紀念其發明者 Julius Richard Petri。 4.純培養物(pure culture) 由一種微生物組成的細胞群體,通常是由一個單 細胞生長、繁殖所形成。 5.培養基(culture medium) 供微生物生長、繁殖的營養基質,根據其中固

          化劑含量的不同可分為固體、半固體、液體 3 種。 6.無菌技術(aseptic technique) 在分離、轉接及培養純種微生物時,防止其 被環境中微生物污染或其自身污染環境的技術。 7.培養平板(culture plate) 常簡稱為平板,指固體培養基倒入無菌平皿,

          冷卻凝固后所形成的培養基平面。 8.稀釋倒平板法(pour plate method) 將待分離的材料稀釋后與已熔化并冷

          卻至 50℃左右的瓊脂培養基混合,搖勻后制成可能含菌的培養平板,保溫培養 后分離得到的微生物菌生長在固體培養基表面和里面。 9.涂布平板法(spread plate method) 在培養平板表面均勻涂布經過稀釋的

          微生物懸液后,保溫培養,在固體培養基表面得到生長分離的微生物菌落。 10.平板劃線法(streak plate method) 用接種環在培養平板表面劃線接種微

          生物, 使微生物細胞數量隨著劃線次數的增加而減少, 并逐步分開。 保溫培養后, 在固體培養基表面得到生長分離的微生物菌落。 11.稀釋搖管法(dilution shake culture method) 將待分離的材料稀釋后與已

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          熔化并冷卻至 50℃左右的瓊脂培養基混合,搖勻后用石蠟封蓋,保溫培養后分 離得到的微生物菌落生長在瓊脂柱中間。 12.單細胞分離法(single cell pick up method) 微生物的單細胞 (孢子),培養后獲得純培養物。 13.富集培養(enrichment culture) 利用不同微生物間生命活動特點的不同, 采用顯微操作技術直接挑取

          制定特定的環境條件,使僅適應于該條件的微生物旺盛生長,從而使其在群落中 的數量大大增加,從自然界中分離到所需的特定微生物。 14.二元培養物(two-component culture) 捕食)的微生物組成的混合培養物。 15.原子力顯微鏡(atomic force microscope) 掃描探針顯微鏡的一種,利用 由兩種具有特定關系(例如寄生或

          細小的探針對樣品表面進行恒定高度的掃描, 同時通過一個激光裝置來監測探針 隨樣品表面的升降變化來獲取樣品表面形貌的信息。 16. 明視野顯微鏡(bright-field microscope) 這種顯微鏡的照明方式為透射照

          明,即光線直接進入視野,在一個相對明亮的背景中形成一個暗的物像。 17.聚焦掃描激光顯微鏡(confocal scanning laser microscope,CSLM) 這種 顯微鏡采用激光作為光源,每次僅對一個點進行照射,從而大大減少樣品其他部 分發出的雜散光的干擾。觀察時通過激光器或載物臺掃描,計算機處理,最終獲 得反差鮮明、高分辨率的三維立體數字圖像。 18.熒光顯微鏡(fluorescence microscope) 這種顯微鏡用紫外線或藍紫光照

          射經過熒光染料染色的樣品,然后觀察激發出的熒光所形成的物像。 19.數值孔徑(numerical aperture) 決定顯微鏡物鏡分辨率性能物理指標,取

          決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質的折射率。 20.相差顯微鏡(phase-contrast microscope) 這種光學顯微鏡通過特殊的裝

          置把樣品不同部位間折射率和細胞密度的微弱差異轉變為人眼可以察覺的明暗 差,可在不染色的情況下對透明的活細胞及其內部結構進行直接觀察。

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          21.分辨率(resolution) 能辨析兩點之間最小距離的能力,距離越小,分辨 率越高。 22.掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope,SEM) 這種電子顯微鏡 用電子束掃描樣品表面,收集從表面發出的二次電子形成樣品的表面圖像。 23.掃描探針顯微鏡(scanning probe microscope) 通過在物體表面移動一種

          敏銳的探針來研究表面特征的顯微鏡(如掃描隧道顯微鏡)。 24.掃描隧道顯微鏡(scanning tunneling microscope) 掃描探針顯微鏡的一

          種,用細小的探針在樣品表面進行掃描,通過檢測針尖和樣品間隧道效應電流的 變化形成物像。 25. 透射電子顯微鏡(transmission electron microscope) 透射樣品,用磁透鏡使散射的電子聚焦成像。 26.反差(contrast) 被觀察物區別于背景的程度。 這種顯微鏡利用特殊的聚光器進 這種顯微鏡用電子束

          27.暗視野顯微鏡(dark-field microscope)

          行斜射照明,經樣品反射或折射的光線進入物鏡成像。 28.固定(fixation) 制樣過程中使整個機體及其細胞的內、外結構被保存并 固定在適當位置的過程。 29.負染色(negative staining) 法。 30.菌絲體(mycelium) 31.菌絲(hypha) 聚成一團的分支菌絲,見于真菌和某些細菌。 染料使背景顏色加深而樣品沒有著色的染色

          大多數霉菌和某些細菌的結構單位,管形絲狀體。

          32.雙球菌(diplococcus) 分裂后成對排列的球菌。 33.球菌。(COCCUS) 細胞大致呈球狀的細菌。

          34.螺菌(spirillum) 剛性的螺旋狀細菌。

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          35.螺旋體(spirochete) 柔韌的螺旋狀細菌,具有周質鞭毛。 36.桿菌(rod) 細胞呈桿狀的細菌。 37.柄細菌(prosthecate bacteria) 細胞上有柄、菌絲、附器等細胞質伸出物,

          細胞呈桿狀或梭狀,并有特征性細柄的細菌。 38.霉菌(mold) 以多細胞絲狀群體形式生存的真菌。 39.真菌(fungi) 有線粒體,無葉綠體,沒有根、莖、葉分化,以無性和有

          性孢子進行繁殖的真核微生物。 40.酵母菌(yeast) 41.藻類(algae) 單細胞真菌。 能進行光合作用的真核微生物。

          42.原生動物(prokaryote) 缺少真正細胞壁,具有運動能力,進行吞噬營養 的單細胞真核微生物。


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