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          微生物学[第二章微生物的纯培养和显微镜技术]山东大学期末考试知识点复习_图文

          山东大学 期末考试知识点复习

          第二章
          一要点提示

          微生物的纯培养和显微镜技术

          1由于微生物个体微小在绝大多数情况下对微生物的研究利用都是使 用其群体 称为培养物 由于一般情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果 因此从混杂的天然微生物群中分离获得某特定的微生物纯培养 是研究和利用微 生物的最重要的环节之一 采用稀释涂布或平板划线技术在琼脂平板上得到微生 物的单菌落是最常用的纯种分离手段而在分离转接及培养微生物纯培养时防 止被其他微生物污染的无菌操作技术是进行微生物学研究的基础 并广泛地被其 他学科和生产实际所利用 2通过分离纯化得到的微生物纯培养物必须通过各种保藏技术使其在一 定时间内不死亡不会因发生变异而丢失重要的生物学性状不会被其他微生物 污染或因自身泄漏而污染环?#24120;?否则就无法真正保证微生物研究和应用工作的顺 利进?#23567;?#20256;代培养冷冻真空干燥保藏低温冰箱保藏及液氮保藏是通常使用的 微生物菌种保藏技术 3微生物个体微小通常必须通过显微镜才能观察到其个体形态而进行 显微观察时分辨率和反差是决定显微观察效果的两个最重要的因素它们与显 微镜的特性有关也取决于样品的制备与观察技术无论是光学显微镜还是电子 显微镜其设备和技术发展迅速应用面越来越广泛和深入 4在显微镜下微生物的大小与形态千差万别丰富多彩是区分不同微生 物和对其进行分类鉴定的重要依据之一 二重点难点剖析 1无菌技术是最基本的微生物学实验操作技术其核心是无菌概念的建立 以及正确而严格地按实验教材和实验课的要求 掌握在各种情况下的具体应用原 则和操作规范 2分离获得某特定的微生物纯培养是研究和利用微生物的基础获得纯

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          培养的方法有固体培养基分离液体培养基分离和单细胞挑取 3 大类(表 2-1) 其中用固体培养基获得单独的微生物菌落是最常用最基本的方法此外还有活 细胞或活体分离法如噬菌体和动植物病毒纯培养的分离等

          3保证所用菌?#20013;?#29366;的稳定是微生物学工作最重要的基本要求否则生产 或科研都无法正常进?#23567;?而目前使用的各种微生物保藏技术归纳起来不外乎生活 态或休眠态两种下面所列的是目前较为常用的一些微生物菌种保藏方法

          值得指出的是由于微生物的多样性不同的微生物往往对不同的保藏方法 有不同的适应性迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜因

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          此在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性保藏物的使用特点及现有 条件等进行综合考虑对于一些比较重要的微生物菌株则要尽可能多的采用各 种不同的手段进行保藏以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失 4显微镜是微生物学研究的重要工具对各类显微镜原理及应用特点的全 面综合了解是微生物学的重点内容之一(表 2-2)

          5样?#20998;?#22791;和显微观察也是微生物学的基本操作之一应按实验教材和实 验课的要求 掌握在各种情况下微生物样?#20998;?#22791;和显微观察的基本原理和操作规 范了解各微生物类群在显微镜下的基本形态特征 三术语或名词

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          1菌落(colony)

          单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长繁

          殖到一定程度形成的肉眼可见的有一定形态结构的子细胞生长群体 2 菌苔(lawn) 固体培养基表面众多菌落连成一片时所形成的微生物生长群 体 3平皿(Petri dish) 由玻璃或透明塑料制成的圆形皿底和皿盖组成皿盖可

          覆盖于皿底之上 防止空气中微生物的污染 其英文名称是为纪念其发明者 Julius Richard Petri 4纯培养物(pure culture) 由一种微生物组成的细胞群体通常是由一个单 细胞生长繁殖所形成 5培养基(culture medium) 供微生物生长繁殖的营养基质根据其中固

          化剂含量的不同可分为固体半固体液体 3 种 6无菌技术(aseptic technique) 在分离转接及培养纯种微生物时防止其 被环境中微生物污染或其自身污染环境的技术 7培养平板(culture plate) 常简称为平板指固体培养基倒入无菌平皿

          冷却凝固后所形成的培养基平面 8稀释倒平板法(pour plate method) 将待分离的材料稀释后与已熔化并冷

          却至 50左右的琼脂培养基混合摇?#32676;?#21046;成可能含菌的培养平板保温培养 后分离得到的微生物菌生长在固体培养基表面和里面 9涂布平板法(spread plate method) 在培养平板表面均匀涂布经过稀释的

          微生物悬液后保温培养在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落 10平板划线法(streak plate method) 用接?#21482;?#22312;培养平板表面划线接种微

          生物 使微生物细胞数量随着划线次数的增加而减少 并逐步分开 保温培养后 在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落 11稀释摇管法(dilution shake culture method) 将待分离的材料稀释后与已

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          熔化并冷却至 50左右的琼脂培养基混合摇?#32676;?#29992;石蜡封盖保温培养后分 离得到的微生物菌落生长在琼脂柱中间 12单细胞分离法(single cell pick up method) 微生物的单细胞 (孢子)培养后获得纯培养物 13富集培养(enrichment culture) 利用不同微生物间生命活动特点的不同 采用显微操作技术直接挑取

          制定特定的环境条件使仅适应于该条件的微生物旺盛生长从而使其在群落中 的数量大大增加从自然界中分离到所需的特定微生物 14二元培养物(two-component culture) 捕食)的微生物组成的混合培养物 15原子力显微镜(atomic force microscope) 扫描探针显微镜的一种利用 由两种具有特定关系(例如寄生或

          细小的探针对样品表面进行恒定高度的扫描 同时通过一个激光装置来监测探针 随样品表面的升?#24403;?#21270;来获取样品表面形貌的信息 16 明?#21491;?#26174;微镜(bright-field microscope) 这种显微镜的照明方式为?#24178;?#29031;

          明即光线直接进入?#21491;?#22312;一个相对明亮的背景中形成一个暗的物像 17聚焦扫描激光显微镜(confocal scanning laser microscopeCSLM) 这种 显微镜采用激光作为光源每次仅对一个点进行照射从而大大减少样品其他部 分发出的?#30001;?#20809;的干扰观察时通过激光器或载物台扫描计算机处理最终获 得反差鲜明高分辨率的三维立体数字图像 18荧光显微镜(fluorescence microscope) 这种显微镜用紫外线或蓝紫光照

          射经过荧光染料染色的样品然后观察激发出的荧光所形成的物像 19数值孔径(numerical aperture) 决定显微镜物镜分辨率性能物理指标取

          决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率 20相差显微镜(phase-contrast microscope) 这种光学显微镜通过特殊的装

          置把样品不同部位间折射率和细胞密度的微弱差异转变为人眼可以察觉的明暗 差可在不染色的情况下对透明的活细胞及其内部结构进行直接观察

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          21分辨率(resolution) 能辨析两点之间最小距离的能力距离越小分辨 ?#35797;?#39640; 22扫描电子显微镜(scanning electron microscopeSEM) 这种电子显微镜 用电子束扫描样品表面收集从表面发出的二次电?#26377;?#25104;样品的表面图像 23扫描探针显微镜(scanning probe microscope) 通过在物体表面移动一种

          敏锐的探针来研究表面特征的显微镜(如扫描隧道显微镜) 24扫描隧道显微镜(scanning tunneling microscope) 扫描探针显微镜的一

          种用细小的探针在样品表面进行扫描通过检测针尖和样品间隧道效应电流的 变化形成物像 25 ?#24178;?#30005;子显微镜(transmission electron microscope) ?#24178;?#26679;品用磁透镜使散射的电子聚焦?#19978;?26反差(contrast) 被观察物区别于背景的程?#21462;?这种显微镜利用特殊的聚光器进 这种显微镜用电子束

          27暗?#21491;?#26174;微镜(dark-field microscope)

          行斜射照明经样品反射或折射的光线进入物镜?#19978;?28固定(fixation) 制样过程中使整个机体及其细胞的内外结构被保存并 固定在适当位置的过程 29负染色(negative staining) 法 30菌丝体(mycelium) 31菌丝(hypha) 聚成一团的分支菌丝见于真菌和某些细菌 染料使背景颜色?#30001;?#32780;样品没有着色的染色

          大多数霉菌和某些细菌的结构单位管形丝状体

          32双球菌(diplococcus) 分裂后成对排列的球菌 33球菌(COCCUS) 细胞大致?#26159;?#29366;的细菌

          34螺菌(spirillum) 刚性的螺旋状细菌

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          35螺旋体(spirochete) 柔韧的螺旋状细菌具有周?#26102;?#27611; 36杆菌(rod) 细胞呈杆状的细菌 37柄细菌(prosthecate bacteria) 细胞上有柄菌丝附器等细胞?#22124;?#20986;物

          细胞呈杆状或梭状并有特征性细柄的细菌 38霉菌(mold) 以多细胞丝状群体形式生存的真菌 39真菌(fungi) 有线粒体无叶绿体没有根茎叶?#21482;?#20197;无性和有

          性孢子进行繁殖的真核微生物 40酵母菌(yeast) 41藻类(algae) 单细胞真菌 能进行光合作用的真核微生物

          42原生动物(prokaryote) 缺少真正细胞壁具有运动能力进行吞噬营养 的单细胞真核微生物


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